Un ELISA basado en células como sustituto del ensayo de neutralización del virus para los anticuerpos específicos del SARS-CoV-2 de RBD

El SARS-CoV-2, causante de la pandemia COVID-19, ha provocado una crisis mundial y la muerte de millones de personas. Se han desarrollado varios ensayos serológicos para determinar la calidad de la respuesta inmunitaria contra el SARS-CoV-2 y la eficacia de las vacunas, entre ellos los ensayos convencionales de neutralización del virus, que son el patrón de oro.
Sin embargo, Bio Med Frontiers estas pruebas consumen mucho tiempo, requieren un nivel de bioseguridad 3 (BSL3) y son de bajo rendimiento y caras.
Esto ha motivado el desarrollo de métodos alternativos, incluyendo ensayos de inhibición molecular.
Aquí presentamos un ensayo seguro de neutralización viral basado en células (cbE-VNT) como sustituto de los ensayos convencionales de neutralización viral que detecta la inhibición de la unión del RBD del SARS-CoV-2 a las células portadoras de ACE2 independientemente de la especie.

100 BP DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-100BP CORNING
1 KB DNA LADDER, 500UL PER KIT
M-DNA-1KB CORNING
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.1 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-.25 ApexBio
DiscoveryProbe? DNA Damage/DNA Repair Library
L1033-5 ApexBio

Nuestra prueba muestra una muy buena correlación con los ensayos de neutralización convencionales y moleculares y alcanza una especificidad del 100% y una sensibilidad del 95%. cbE-VNT es rentable, rápida y permite una evaluación serológica a gran escala que puede realizarse en un laboratorio BSL2, lo que permite su uso en investigaciones preclínicas y clínicas.

Rendimiento comparativo de los ensayos ELISA y dot blot para la detección de anticuerpos contra el receptor de TSH en la enfermedad de Graves.
La enfermedad de Graves (EG) es una enfermedad autoinmune, y representa los principales casos de hipertiroidismo. Los anticuerpos contra el receptor de la hormona estimulante de la tiroides/TSHR (TRAb) son responsables del hipertiroidismo y se consideran un marcador de diagnóstico de la EG. Por lo tanto, desarrollamos una proteína recombinante de TSHR-169 humana (hTSHR-169), que se reconoció específicamente TRAb en el suero de los pacientes de GD, y luego comparar el rendimiento de diagnóstico entre ELISA y dot blot de pruebas TRAb para su capacidad de diagnóstico de GD.

Rabbit Polyclonal antibody Anti-CRBN
Anti-CRBN
Rabbit anti-MARV VLP antiserum
01-0005
Rabbit anti-MARV VP40 pAb
0303-001
Rabbit anti-MARV GP pAb
0303-007
Rabbit anti-MARV GP pAb
0303-007-bio

Se inscribieron 20 pacientes con EG y 20 individuos sanos de la población indonesia. Se cuantificó la concentración y la densidad de TRAb. Se realizó un análisis comparativo mediante el análisis de la curva operativa del receptor (ROC).
Para el ensayo dot blot, la concentración mínima para detectar TRAb requiere 100 ng de antígeno con antisuero diluido a 1:60.
Para el diagnóstico de la EG, el ELISA arrojó un AUC más alto en comparación con el ensayo dot blot (0,95 y 0,85, respectivamente). Utilizando los valores de corte recomendados, se examinó la eficacia de ambos ensayos comparando la especificidad y la sensibilidad de los mismos con el diagnóstico clínico.

Protein A protein
Fitzgerald
pLDH Protein Protein
Abbexa
pLDH Protein Protein
Abbexa

El ELISA mostró un 80% y un 95%, mientras que el ensayo dot blot mostró un 70% y un 95% de sensibilidad y especificidad, respectivamente.
Aunque el ensayo dot blot mostró un menor rendimiento que el método ELISA, el ensayo dot blot es un ensayo de diagnóstico sencillo y rápido que resulta adecuado para diagnosticar la EG en zonas rurales, en las que a veces no se puede acceder a los centros sanitarios.

Desarrollo y evaluación del ensayo ELISA de anticuerpos indirectos para el diagnóstico precoz y la vigilancia de la infección por fiebre hemorrágica de Crimea-Congo en seres humanos.

La fiebre hemorrágica de Crimea-Congo (FCHC) es una importante enfermedad viral zoonótica transmitida por garrapatas en humanos.
El virus de la FHCC provoca casos esporádicos de enfermedad grave en una enorme zona geográfica que va desde África hasta Europa y Asia, incluida la India. La FHCC se ha convertido en un importante problema de salud pública en los estados occidentales de la India, incluidos Gujarat y Rajastán, donde se han notificado casos humanos regulares desde el año 2011.
Los seres humanos son el huésped final y se infectan a través de la picadura de garrapatas infectadas, en estrecho contacto con rumiantes y en los mataderos.
Actualmente, la detección de esta infección mortal se limita al laboratorio BSL-4, que es escaso incluso en las economías desarrolladas. Por lo tanto, un ensayo seguro y sensible para el inmunodiagnóstico temprano es crucial para la gestión de la enfermedad y la contención del brote.

Paraffin Wax Dispenser
Scientific Laboratory Supplies
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
Paraffin wax, granular (56 - 60)
Glentham Life Sciences
MagSi-WAX
AMSBIO
MagSi-WAX
AMSBIO

En este estudio, la nucleoproteína recombinante conservada fue explotada como un antígeno alternativo seguro y escalable para el desarrollo de plataformas de detección ELISA de IgM e IgG indirectas.
El ELISA indirecto se evaluó utilizando muestras clínicas sospechosas recogidas en zonas conflictivas de la India. La comparación con el ELISA MAC de referencia y el ELISA IgG reveló una correlación del 95% y el 100% respectivamente. Los resultados indican que el ELISA indirecto IgM e IgG desarrollado tiene una alta sensibilidad y especificidad para detectar anticuerpos contra el CCHFV entre los seres humanos.
Estos ensayos son fáciles de realizar y pueden emplearse para el cribado de alto rendimiento de muestras humanas para el diagnóstico clínico, así como para la vigilancia serológica. Estos ensayos también se pueden convertir en formatos de prueba de bajo costo para el punto de atención para su aplicación en entornos de recursos limitados.

Evaluación de dos pruebas rápidas de flujo lateral y dos ELISA sustitutos para la detección de anticuerpos neutralizantes específicos del SARS-CoV-2

A medida que la vacunación contra el SARS-CoV-2 avanza rápidamente en todo el mundo, la detección fiable de anticuerpos neutralizantes específicos del SARS-CoV-2 (NAb) se ha convertido en un componente indispensable del diagnóstico serológico.
Se evaluó el rendimiento de cuatro pruebas disponibles en el mercado, a saber, dos ensayos de flujo lateral (Coris BioConcept COVID-19 Sero NP/RBD y Concile InfectCheck COVID-19 NAb) y dos pruebas ELISA sustitutivas (sELISA) (EUROIMMUN SARS-CoV-2 NeutraLISA y AdipoGen SARS-CoV-2 Neutralizing Antibodies Detection Kit) en comparación con una prueba interna de microneutralización del SARS-CoV-2 como referencia.

MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR MASTITIS PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
MULTIPLEX KIT PCR Babesia & Theileria PCR kit
Bioingentech
ranavirus PCR kit
Bioingentech

Se analizaron un total de 334 sueros, incluyendo 30 muestras recogidas antes de la aparición del SARS-CoV-2, 128 sueros de pacientes convalecientes, así como 176 sueros de individuos parcial o totalmente vacunados.
La sensibilidad global de los LFAs fue diferente y fue del 71,6% para el Coris y del 98,4% para el Concile. En cambio, la sensibilidad global del NeutraLISA fue del 86 y del 98% para el AdipoGen. Todas las pruebas mostraron la mayor sensibilidad cuando se analizaron muestras de individuos totalmente vacunados, alcanzando ambas sELISA una sensibilidad del 100%. La especificidad global fue del 89,3% para el Coris y sólo del 58,3% para el Concile.
Del mismo modo, se observaron diferencias significativas para ambos ELISA, con una especificidad global del 82,1% para el NeutraLISA y sólo del 54,8% para el AdipoGen. Todas las pruebas mostraron una especificidad del 100% cuando se analizaron muestras de control negativo, mientras que las especificidades fueron más bajas cuando se analizaron muestras de individuos parcialmente vacunados.
Preparación de una columna de inmunoafinidad basada en un anticuerpo monoclonal biespecífico para la detección de aflatoxina B 1 y ocratoxina A combinada con ic-ELISA.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier
Chicken thrombomodulin,TM ELISA KIT ELISA
QY-E80092 Qayee Biotechnology
Oxycodone ELISA
EK7130 BosterBio
Amphiphysin ELISA
LF-EK0189 Abfrontier

Se preparó una novedosa y eficiente columna de inmunoafinidad (IAC) basada en un anticuerpo monoclonal biespecífico (BsMAb) que reconoce la aflatoxina B1 (AFB1) y la ocratoxina A (OTA) y se aplicó en la extracción simultánea de AFB1 y OTA de muestras de alimentos y la detección de AFB1/OTA combinada con ic-ELISA (ELISA competitivo indirecto).
Se fusionaron dos líneas celulares deficientes, la línea celular de hipoxantina-guanina fosforibosil-transferasa (HGPRT) deficiente anti-AFB1 y la línea celular de timidina quinasa (TK) deficiente anti-OTA, para generar un hibridoma que produjera BsMAb contra AFB1 y OTA. El subtipo del BsMAb fue IgG1 mediante la prueba del kit de isotipado de anticuerpos de ratón. La pureza y el peso molecular de los BsMAb fueron confirmados por el método SDS-PAGE.
La tasa de reacción cruzada con AFB2 fue del 37%, con AFG1 del 15%, con AFM1 del 48%, con AFM2 del 10% y con OTB del 36%. Se observó una reacción cruzada insignificante con otros compuestos probados. La constante de afinidad (Ka) se determinó mediante ELISA.
La Ka (AFB1) y Ka (OTA) fue de 2,43 × 108 L/mol y 1,57 × 108 L/mol, respectivamente. A continuación, se acopló el BsMAb anti-AFB1/OTA con CNBr-Sepharose, y se preparó un IAC AFB1/OTA. Se optimizaron el tiempo de acoplamiento y las condiciones de elución del IAC.
El tiempo de acoplamiento fue de 1 h con una tasa de acoplamiento del 90%, el eluyente fue metanol-agua (60:40, v:v, pH 2,3) que contenía 1 mol/L de NaCl, y el volumen del eluyente fue de 4 mL. Las capacidades de la columna de AFB1 y OTA fueron de 165,0 ng y 171,3 ng, respectivamente. Tras siete veces de uso repetido, las tasas de conservación de la capacidad de la columna para la AFB1 y la OTA fueron del 69,3% y el 68,0%, respectivamente.
El ic-ELISA para AFB1 y OTA se aplicó combinado con IAC. El IC50 (concentración inhibidora del 50%) de AFB1 fue de 0,027 ng/mL, el límite de detección (LOD) fue de 0,004 ng/mL (0,032 µg/kg), y el rango lineal fue de 0,006 ng/mL~0,119 ng/mL.
El IC50 de la OTA fue de 0,878 ng/mL, el LOD fue de 0,126 ng/mL (1,008 µg/kg), y el rango lineal fue de 0,259 ng/mL~6,178 ng/mL. En condiciones óptimas, las muestras de maíz y trigo fueron pretratadas con AFB1-OTA IAC. Las tasas de recuperación de AFB1 y OTA fueron del 95,4%~105,0% con ic-ELISA, y las correlaciones entre los resultados de detección y LC-MS fueron superiores a 0,9. El IAC desarrollado, combinado con ic-ELISA, es fiable y podría aplicarse a la detección de AFB1 y OTA en los granos.

Un ELISA comercial anti-TIF1γ es superior a la línea y al Dot Blot y debería considerarse como parte de las pruebas rutinarias de anticuerpos específicos de la miositis.

Custom Antibody titration by ELISA up to 2 rabbits and 1 bleed
ELISA-1 Alpha Diagnostics
Beta2-Microglobulin ELISA kit ELISA Kit
LF-EK60047 Abfrontier

El anticuerpo antiTIF1γ es un autoanticuerpo importante en el diagnóstico de la dermatomiositis asociada al cáncer y el autoanticuerpo más común en la dermatomiositis de inicio juvenil.
Su detección fiable es importante para instigar investigaciones adicionales sobre la malignidad subyacente en los adultos. Anteriormente, demostramos que los ensayos comerciales que utilizan líneas y dot blots no detectan de forma fiable el anti-TIF1γ.
Nuestro objetivo es probar un nuevo ELISA comercial y compararlo con la inmunoprecipitación de proteínas obtenida anteriormente.

La inmunoprecipitación radiomarcada se había utilizado previamente para determinar el estado de los autoanticuerpos en pacientes con miopatías inflamatorias inmunomediadas y en varios controles sanos. Se llevó a cabo una prueba ELISA en sueros sanos de control y anti-TIF1γ y se comparó con los datos de la inmunoprecipitación anterior.

Se analizaron un total de 110 muestras de suero: 42 pacientes de miositis con anti TIF1γ y 68 sueros de control sano negativos a los autoanticuerpos. Se detectó la presencia de anti-TIF1γ por ELISA en 41 de las 42 muestras positivas a anti-TIF1γ por inmunoprecipitación, y en ninguna de los controles sanos, lo que arrojó una sensibilidad del 97,6% y una especificidad del 100%. La tasa de falsos negativos fue del 2%.
El ELISA es un método asequible y eficiente en el tiempo que resulta preciso para detectar el anti-TIF1γ.

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